ddPCR檢測實驗流程

 

ddPCR workflow

1.制備含有核酸樣品的ddPCR反應液

2.制備微滴

3.使用EvaGreen或水解探針進行PCR擴增

4.讀取并分析結果

 

 

ddPCR檢測系統——Bio-Rad QX200 Auto DG Droplet Digital PCR System

 

QX200QX200 Droplet Digital PCR 系統由兩個儀器(QX200 微滴生成儀和 QX200 微滴分析儀)及其相關的消耗品構成。

QX200 液滴生成儀用于將 PCR 反應生成 20,000 個納升大小的液滴。在使用熱循環儀進行 PCR 后,QX200 微滴分析儀將逐個分析每個樣品中的液滴。微滴被吸入后,管路將分解乳化的液滴,并使它們依次通過一個雙色光學檢測系統。每次運行最多可處理 96 個樣品。系統將計算陽性和陰性微滴的數量,從而以數字格式對靶 DNA 進行絕對定量分析。此外,對于經過 PCR 的液滴,還可以提取擴增的產品以用于下游環節,例如測序或克隆。在微滴生成的過程中,消除不同操作者的人為操作誤差,確保微滴發生的一致性,標配HEPA過濾網等,尤其可滿足高通量實驗室的要求。

 

 

 

ddPCR檢測服務報價和周期

服務內容 單價 實驗期限
樣品DNA提取及模板制備 100元/樣品 1~2個工作日
數字PCR檢測反應 600元/樣本/基因 3~5個工作日
樣品RNA提取及模板制備 200元/樣品 2~3個工作日
探針設計合成 Taqman 1000元/條 3~5個工作日
MGB 1500元/條 3~5個工作日

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ddPCR檢測服務樣品要求和周期

ddPCR Sample

 

 

 

 

 

 

 

 

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樣品準備

一、基因組DNA

樣品濃度不低于10 ng/ul,總體積不少于50u

二、細胞樣品

  1. 單層培養細胞需要提供大于10的6次方的細胞量,相當于六孔板一個孔的細胞量。收取細胞時,可以吸凈培養液,加入1毫升trizol反復吹打15次,把貼壁細胞完全洗脫下來,然后轉移到無RNA酶的1.5ml的離心管里,干冰或低溫冰塊運輸。
  2. ?細胞懸液離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打,干冰或低溫冰塊運輸。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。

三、組織樣品

  1. 提供新鮮動物的組織(液氮速凍)、液氮保存組織、-80度保存的組織50mg-100mg,干冰運輸。如果沒有上述條件可以將新鮮的組織50mg-100mg保存在1ml的RNAlater里,干冰或低溫冰塊運輸。
  2. ?提供新鮮的植物組織500mg-1g,用錫箔紙包括組織,-80度保存(特別要求不能反復凍融)。干冰運輸。

四、外周血和液體樣本

  1. 提供1ml EDTA抗凝的全血,-80度保存,保存時間不要超過2年。干冰運輸。
  2. ?提供1ml血漿或血清,-80度保存,保存時間不要超過2年。干冰運輸。

 

聲明:我們不接受有致病性的樣品,否則造成的后果由委托方負責。如果您的樣品帶有致病性,請您提供給我們基因組DNA,并將其進行加熱處理以殺死致病原體。

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詳情請咨詢400-801-8280或發送郵件至[email protected].cn